date:2022-01-04 17:35:29
ibidi的傷口愈合系列產品，一直以來受到各個領域專家的一致好評。在此我們收集了研究者的一些疑問，今天我們就這些問題進行簡答的解答。ibidi傷口愈合插件設計精巧，操作簡單，標準化的數據分析方法恰恰彌補了傳統實驗方法的不足。
問題一：要放多少細胞？
經常會有老師對放多少細胞產生疑問，對于細胞量來說，我們的目的是要在插件的培養孔里面形成單層的細胞。細胞密度既不能過低，也不能過高。以35mm培養皿為例，通常采用下面的步驟：
1. 準備5 x 105 cells/ml的細胞懸液. 105
2. 每孔加入 70 µl / 100 µl細胞懸液 (2孔或3孔插件每孔種35,000個細胞，4孔傷口愈合插件每孔種55,000個細胞）。
3. 37 °C孵育24小時。
4. 用滅菌鑷子移除傷口愈合插件。
5. 在35mm培養皿內加入1ml新鮮培養基。
6. 放于倒置顯微鏡載物臺上，以4X-20X物鏡采集初始圖片，并按實驗節點設置在同一位置采集圖片。
問題二：插件尺寸多大？能放進6/24孔板么？能產生的劃痕寬度是多少？
Ibidi當前有三種傷口愈合插件：2孔3孔和4孔插件，其中2孔和3孔插件單孔容積為70μl，尺寸分別為8.4 mm x 8.4 mm和 12.15 mm x 8.4 mm。單孔的細胞生長面積均為0.22cm2。4孔的單孔容積為110μl，插件的直徑為17mm，每孔的生長面積為0.35cm2，三種插件均能放入六孔板中，2孔傷口愈合插件也可放進24孔板。所有的插件均能產生500μm的劃痕。此外，4孔插件除了能產生四個500μm的劃痕外，還包括一個1mm的中間劃痕。
問題三：只買插件能放在日常的培養耗材中么？對底部有什么要求？能用于蛋白包被過的表面么？自己放會不會漏液？
傳統方法
vs
ibidi傷口愈合插件
Ibidi的三種傷口愈合插件均有只提供單插件的包裝，需要研究人員自己準備培養耗材。如果對成像無過高的要求，均可以使用日常的培養耗材，Ibidi插件采用硅膠材質，底部為靜電吸附，無膠水，只需要底部是平整干凈即可。如果是蛋白包被的表面，則需要蛋白包被層完全干燥后，才能將插件放上面，插件不能貼在潮濕的表面，具體的包被建議先做預實驗測試一下。在放入插件后，可以用滅菌鑷子輕輕壓插件的四壁，確保插件與底部完全貼合。
問題四：ibidi插件能夠反復使用么？
盡管ibidi插件的材質可以濕熱滅菌并且對乙醇穩定，但是，ibidi并不建議重復使用ibidi插件，由于是靜電吸附的原理，重復操作對底部的影響不可控。有可能會發生漏液等現象，影響實驗的重復性。ibidi沒有重復使用的經驗，如果研究人員一定要重復使用，可能需要研究人員自己測試一下。
問題五：該如何采集圖片？需要采集同一培養皿的同一劃痕區域么？
由于劃痕實驗的本質就是觀測細胞遷移的速率。一般情況下需要根據實驗設計幾個圖像采集實驗時間點，之后盡量在同一區域采集圖像。比如下圖采集為0h，10h，16h，這樣獲得的結果對比一目了然。
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