date:2024-08-29 14:13:11
管形成實驗是一種簡單但高效的的體外研究方法，用于篩選具有抗血管生成或促血管生成效果的物質。這些效果可以通過不同的參數來衡量，例如管的長度或凝膠表面上形成的環(huán)狀結構數量。
要從管形成實驗中得出高效的分析結果，需要在實驗前、實驗中和實驗后考慮幾個方面，以確保結果的準確性和可重復性。
本應用提供了在收集管形成實驗數據后進行分析的指南，并專注于分析和解釋這些數據。為優(yōu)化您的實驗，請閱讀應用: Optimizing Tube Formation Assays優(yōu)化管形成實驗。
ibidi為血管生成實驗提供多種解決方案：
1、管形成和血管生成分析的輸出參數
“管”一詞描述的是在二維網狀中可見的細胞索，它 并不一定意味著這些細胞索有管腔。在管形成實驗中，可以從相位對比圖像中確定四個關鍵參數，如下圖所示：• 細胞覆蓋面積[%] (藍色區(qū)域)• 管長度[px] (紅色線條)• 分支點數 (白色點)• 環(huán)狀結構數量 (黃色數字)這些關鍵參數在實驗過程中彼此之間表現出一致的關系。因此，僅確定一個特征可能就足夠了：在本應用說明中，僅將管的長度作為管形成的代表性值。
相位圖像（A）和分析圖像（B）顯示了管形成分析的關鍵特征：細胞覆蓋面積（藍色）、管（紅色）、環(huán)路（黃色）和分支點（白色）。根據這些參數，可以計算出其它值，如平均管長、總管長和環(huán)的平均面積。
從這些參數可以計算出更多的值，如平均管長、總管長度和環(huán)狀結構的平均面積。
1.1、計算總管長度
可以使用專用于管形成實驗分析的各種軟件進行圖像分析。
自動化管形成分析的示例輸出示例
2、統計分析
血管形成是一個涉及各種各樣的生化反應和信號通路復雜的過程。因此，建議每種處理條件至少使用三個生物學重復樣本進行統計分析，以獲得代表性值。
為了進行可靠的分析并獲得平均值，我們推薦對每個條件進行多孔分析和復制。例如，每個被分析的孔都會得出一個管長值。這些值應該針對每個條件進行平均，并計算標準偏差。從同一載玻片上在相同條件下收集的數據點之間的標準偏差應小于10%。如果孔與孔之間的變化差異太大，則應參考以下應用指南來優(yōu)化實驗條件：Optimizing Tube Formation Assays。
以下圖表示例性地顯示了在兩種不同條件（Condition1與Condition2）下生長在 Matrigel®基質膠上的HUVEC細胞的總管長。使用搭載于相差顯微鏡上的ibidi Stage Top Incubator進行成像。對于每種條件，在四個不同的時間點（0h、4h、6h 及24h）分別對八個獨立的孔進行了成像。
對兩種生物條件下，四個不同時間點(0小時、4小時、6小時和24小時)的八個獨立孔的總管長度進行示例性數據分析。單個數據以點狀圖(左側)和箱線圖（右側）的形式顯示。
這些單一數據點隨后被聚合并展示在一個箱線圖中。統計分析可以通過例如方差分析（ANOVA）或t檢驗（Student’s t-test）來進行，其中將不同條件的數據點相互測試。例如，t檢驗（Student’s t-test）提供了證據，表明兩個獨立的、具有t分布值的數據集之間是否存在統計學上的顯著差異。
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